ASCH VAPOSCAN 经皮水分流失测量仪助力外用益生菌在特应性皮炎作用机制探索

「摘要」

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副干酪乳杆菌是一种益生菌，对多种过敏性疾病具有积极作用，并可通过调节免疫发挥作用，其中树突状细胞是其关键靶标之一。

2025年7月，麻布大学兽医药理学实验室的Mao Kaneki等研究团队在Preprints.org预印本平台发表了一篇题为“Topical Administration of a Mixed Microbial Culture of Lactobacillus paracasei, Pichia membranifaciens and Saccharomyces cerevisiae Significantly Inhibits the Development of Atopic Dermatitis in a Mouse Model Through IL-10 over Expression by Dendriti”的文献。

该研究采用混合微生物培养物LS（含副干酪乳杆菌、膜状毕赤酵母和酿酒酵母），通过特应性皮炎小鼠模型，评价LS经皮肤给药的影响效果。方法上，利用小鼠树突状细胞系检测IL-10和TNFα水平以评估免疫调节作用；在刺激的人表皮角质形成细胞中，通过IL-8和胸腺细胞因子的产生评价抗炎效应。在AD小鼠模型中，局部使用10% LS软膏，每周记录临床症状、背部皮肤厚度及经表皮水分流失，并在尸检后分析耳淋巴结的免疫反应。结果显示，LS处理增强了DC2.4细胞分泌IL-10和TNFα的能力，同时降低了刺激的HaCaT细胞产生IL-8和TARC。在治疗组中，症状、皮肤厚度或TEWL未见明显改变，但局部淋巴结中IgE阳性B细胞数量和IL-4水平有所下降。预防性涂抹LS减轻了AD症状。结果表明，LS通过免疫调节和抗炎作用能阻止AD的发展。 

 

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实验材料与仪器

 

材料

LS培养物、小鼠树突状细胞系、培养基、10%胎牛血清、青霉素-链霉素、4%十二烷基硫酸钠溶液、DAPI染色剂、多种单克隆抗体、心浸液琼脂、酶联免疫吸附测定试剂盒、小鼠T-激活剂CD3/CD28磁珠。

实验动物：小鼠

 

仪器

ASCH VAPOSCAN 经皮水分流失测量仪、CellDrop细胞计数系统、BD FACSAria III细胞分选仪、酶联免疫吸附测定相关检测设备。

ASCH VAPOSCAN 经皮水分流失测量仪

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「实验过程」

 

本研究实验分为体外实验和体内实验两部分，同时对实验数据进行专业统计分析，具体过程如下：

 

体外实验：验证LS的免疫调节与抗炎作用

1. 树突状细胞实验：将70%融合度的DC2.4细胞以1×10⁴个/100μL的密度接种于96孔培养板，分别暴露于0、0.125、0.25、0.5、1mg/mL浓度的LS中，通过ELISA试剂盒定量检测细胞上清液中IL-10和TNFα的浓度。

2. 角质形成细胞实验：将70%融合度的HaCaT细胞以1×10⁴个/100μL的密度接种于96孔培养板，经重组人TNFα和IFNγ刺激1h后，加入含0、0.125、0.25、0.5、1mg/mL LS的培养基共培养24h，通过ELISA试剂盒定量检测细胞上清液中IL-8和TARC的浓度。

 

体内实验：探究LS经皮给药对AD小鼠模型的治疗与预防作用

1. AD小鼠模型构建：对NC/Nga小鼠经皮致敏Biostir AD，并经皮涂抹4%十二烷基硫酸钠溶液，构建特应性皮炎小鼠模型。

2. 治疗性给药实验：在AD模型建立后的第19天（小鼠平均AD评分为2.07）开始给药，实验组每日经皮涂抹0.1mL/只的10% LS溶液，对照组每日经皮涂抹等体积去离子水，实验期间每周监测小鼠的AD评分、背部皮肤厚度、TEWL；实验结束后收集小鼠耳淋巴结样本，制备单细胞悬液并计数，通过细胞分选仪分析免疫细胞亚群，通过磁珠刺激T细胞后采用ELISA检测细胞因子水平，同时对小鼠皮肤样本进行盲法半定量组织病理学评估。

3. 预防性给药实验：设置AD对照组和LS预防性处理组，对LS组小鼠提前进行10% LS溶液经皮给药，后续监测指标、样本检测与分析方法与治疗性给药实验一致。

 

数据统计分析

体外实验采用方差分析结合邓尼特多重比较检验；体内实验采用双因素方差分析结合Šídák多重比较检验或学生t检验，以5%为概率水平判定统计明显性，所有数据通过GraphPad Prism 10分析，结果以平均值±标准误表示。

 

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「实验结论」

副干酪乳杆菌、膜毕赤酵母和酿酒酵母的混合微生物培养物（LS）具备免疫调节和抗炎作用。在体外培养中，LS能促进小鼠树突状细胞系DC2.4分泌IL-10和TNFα，并剂量依赖性地抑制经TNFα/IFNγ刺激的人表皮角质形成细胞系HaCaT产生IL-8和TARC。在AD小鼠模型中，治疗性给药未改善小鼠的临床症状、皮肤厚度和经表皮失水量，但改善了皮肤角化层增生、表皮痂皮等组织病理学特征，同时降低了局部淋巴结中IgE阳性B细胞数量和IL-4水平；而预防性给药效果更明显，降低了AD临床评分，改善了皮肤组织病理学特征，并减少了局部淋巴结中的效应T细胞数量和IL-13水平。整体而言，LS通过免疫调节和抗炎作用，能够有效预防特应性皮炎的发生发展。